Sunview® Ⅲ Reverse Transcriptase kit(with dsDNase)
Sunview® Ⅲ Reverse Transcriptase kit(with dsDNase)
产品简介
Sunview® III Reverse Transcriptase kit (with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链 cDNA 合成试剂盒，包含M-MLV SWIII Reverse Transcriptase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的 cDNA，下游可用于 qPCR、普通 PCR 等实验。
RNA 中存在基因组 DNA 污染，如果反转录前不做去除处理，下游进行 qPCR 反应时基因组 DNA 与 cDNA 会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用 dsDNase 高效去除基因组 DNA 污染，区别于常规的 DNase I，dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA（dsDNA 以及 DNA 与 RNA 的杂合链），并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染的方法相比，dsDNase 无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。Sunview® III Reverse Transcriptase kit (with dsDNase) 作为升级 后的一链 cDNA 合成试剂盒，15 分钟内最长可获得 12 kb cDNA。可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组 DNA污染与反转录分开进行的操作方法，或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。
储运条件
-20℃
产品组成
使用方法
针对基因组含量低的 RNA 样品（推荐方案）
① 于冰上配制如下反应体系：
a.推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
④ 55℃温育 15 min；
⑤ 反应结束后， 85℃温育 5 min 以终止反应；
⑥ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上， 用于后续实验；或立即保存于 -20℃。
a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。 ② 轻柔吸打混匀，瞬离； ③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染； 注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃温育时间至 5 min。 ④65℃温育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。
2.第一链 cDNA 合成 ① 于冰上配制如下反应体系：
② 轻柔吸打混匀，瞬离； ③ 50℃温育 15 min； 注：若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构，可预先 25℃温育 10 min。 ④ 反应结束后， 85℃温育 5 min，以终止反应； ⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。 注： cDNA 溶液置于 -20℃储存，建议不超过 1 周；置于 -80℃可长期储存。 |
注意事项
预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA， 也适用于不含 Poly(A) 结构的原核 生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等 小 RNA 模板。
