Sunview® SYBR Green qPCR SuperMix (Universal)

Sunview® SYBR  qPCR SuperMix(Universal)

货号:QE010-02          规格：5*1ml

储运条件

 -20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用，溶解后可在2~8℃避光条件下稳定存放1个月。避免反复多次冻融。

产品组成

产品简介

Sunview® SYBR qPCR SuperMix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法专用 qPCR 试剂，为 2× 预混液，包含除引物和 DNA 样品以外的所有 qPCR 组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，配合精心优化的Buffer 体系以及 PCR 反应促进因子，使产品具有特异性强、扩增效率高等特点，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的 qPCR 结果。

预混液中含有独特校正染料，与一系列ROX  qPCR 设备兼容，包括需要校正的仪器，实验操作过程中不需要额外添加染料来校正仪器。

使用方法

1. 使用注意

① 因 Mix 中预混有染料， 其保存或反应体系配制过程应避免强光照射； ② 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix， 请勿涡旋振荡混匀， 避免产生过多 气泡 ;

③ Mix 中含有 Universal  校正染料， 适用于所有机型， 无需额外添加 染料。

2. 建议的 qPCR 反应体系

a. 通常推荐的引物终浓度为 0.2 μM，反应效果不佳时可在 0.1~1 μM 范围内进 行调整；

b. 推荐模板加样量为 1~2 μl，如模板类型为未稀释 cDNA 原液，模板添加量不 应超过总反应体系的 10%。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同， 必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的 DNA 模板添加量。

3. qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）

a. 根据引物的 Tm 值进行退火 & 延伸（退火） 温度的设定；若扩增片段在 200  bp 以内， 退火 & 延伸（延伸）时间可以设置为 15 sec；此外， 退火 & 延伸（延伸） 时间的设置还需根据您使用的 qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整；

b. 不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别， 一般可使用仪器默认的熔解曲线 采集程序。

4. 实验优化

若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优 化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：

① 引物浓度调整

当引物终浓度在 0.1~1.0 μM 范围之间变化时，引物浓度越低， 扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。

② 扩增程序优化

需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高 扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。

5. 引物设计原则

① 扩增产物长度建议控制在 80~200 bp；

② 引物长度为 18~25 bp；

③ 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1℃为佳，Tm 值控制在 58~62℃为佳；

④ 引物的 GC 含量控制在 40%~60% 之间；

⑤ 引物 A、G、C、T 整体分布尽量要均匀，避开 T/C 或者 A/G 的连 续结构（特别是 3' 端）；

⑥ 引物 3' 端最后一个碱基最好为 G 或者 C；

⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列；

⑧ 使用 NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。