Exosome（外泌体）简介跟提取方法
一、 Exosome 简介
Exosome（外泌体）是活细胞分泌的直径约为30-150nm间的膜性囊泡，其天然存在于生物的体液中，包括血液、尿液、唾液、脑脊液、乳液等。exosome由于携带的蛋白质不同，而能够发挥不同的生物学功能。例如，肿瘤细胞分泌的exosome能够介导血管再生肿瘤细胞增殖及免疫逃逸；而树突状细胞源性exosome则能够引起机体有效的抗肿瘤免疫应答。目前研究发现，Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA，并且exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能，故exosome有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。Exosome携带蛋白质包括源细胞非特异性和源细胞特异性两类蛋白分子。前者可能与exosome的生物发生和生物学作用有关，主要包括：细胞溶质蛋白、参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、热休克蛋白和四跨膜蛋白；另一类是特殊蛋白质，这类蛋白质只存在于某种特殊的细胞分泌 的exosome，而这些特定细胞源的exosome与其生物学功能有着密切联系，例如分子来源的Exosome上含有MHCII类分子。 胞源的exosome与其生物学功能有着密切联系，例如分子来源的Exosome上含有MHCII类分子。
二， Exosome 提取
外泌体的提取主要包括以下几种方式。
一．超速离心法，这是目前外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。
二．过滤离心， 这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性 ，但同样存在纯度不足的问题。
三．密度梯度离心法， 用此种方法分离到 的外泌体纯度 高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。
四．免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性， 不便进行下一步的实验 。
五．PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。
六．色谱法，这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一， 但是需要特殊的设备 ， 应用不广泛 。
七.试剂盒法(此处推荐深圳市尚唯生物科技有限公司提供Sunview外泌体提取试剂盒），Sunview TM Exosome Isolation Regent用于高效、快速、方便的从血浆、细胞培养上清液、尿液、组织液中体取exosome 的试剂盒。仅需通过简单操作和常规离心机即可从样本内中获取大量结构完整的exosome。相比传统的超速离心法，Sunview TM Exosome Isolation Regent提取效率更高，更节省时间和样本，提取的exosome可用于Western Bloting、qPCR、功能验证、Elisa等后续实验。
